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        GBfectene-Elite高效轉染試劑
         

        完全和lipo2000媲美的高效轉染試劑

        ----GBfectene-Elite

         

        GBfectene-Elite轉染試劑是一種新型的真核細胞轉染試劑。該試劑可與DNA形成穩定的復合物,保護DNA免受降解,從而高效地將DNA轉染至真核細胞中。它不但適用于多種常用類型的細胞系,也適合一些難轉染的細胞,如 Jurkat 和 RAW264.7 等。與其它轉染試劑相比,GBfectene-Elite轉染試劑轉染效率高、細胞存活率高,毒性小,廣泛用于瞬時和穩定轉染, 也可以應用于蛋白表達和基因功能的研究。

         
        特點
         
         轉染效率高
         蛋白表達水平高
         毒性低,可用于原代細胞轉染

         操作簡便,轉染后無介質變化要求

        適用范圍
            

        將外源DNA分子導入真核細胞已成為研究和控制細胞內基因表達的重要工具,它可用于生化特性、突變分析以及細胞生長行為的研究。此外,還被廣泛應用于研究疾病的分子致病機制,包括遺傳與環境因子的復雜互作、新藥研究、基因診斷,疫苗及保健品的開發等。

         

        操作流程
          以下操作步驟以24孔板為例,遵循以下操作方法可以高效地將DNA轉染貼壁和懸浮培養的多種真核細胞。但是對某些特殊的細胞系和培養條件,或特殊應用等,也許需要單獨特別優化,請參考表一至表三。
        A. 細胞鋪板
         
          貼壁細胞數量:轉染前的18-24個小時,在24孔板的每個孔中加入500 μl含有0.6-1.3 x 105個細胞的無抗生素生長培養基(確保轉染時細胞密度在70-80%)。
        懸浮細胞數量: 轉染實驗的當天,在24孔板的每個孔中加入500 μl含有1-2.5 x 105個細胞的無抗生素生長培養基。注意確保轉染時細胞沒有過度生長或處于休止期。
         
        B. DNA/GBfectene-Elite轉染復合物的制備
         
         

        1、將GBfectene-Elite轉染試劑放置于室溫中,使用前輕輕混勻。
        2、將100 μl DMEM或其他培養液(無血清和無抗生素)加入無菌試管中。 
        3、在上述含有DMEM培養液的試管中加入0.5 μg 或1 μg待轉染的DNA質粒等,并充分混勻。隨后在管子中加入經優化實驗得到的GBfectene-Elite 最佳用量(見重要提示4),快速渦旋混合使其完全混勻。  
        4、室溫靜置10分鐘,從而獲得100 μl DNA/GBfectene-Elite 轉染復合物(注:該轉染復合物在室溫下可保質1 小時)。

         
        C轉染過程
         
          1、在每個細胞培養孔不同部位逐滴加入100 μl DNA/GBfectene-Elite的轉染復合物(由步驟B制備所得),輕輕前后晃動培養板使其混勻。
        2、放置在37 ℃,5%CO2培養箱中培養。
        3、轉染24-48小時后,收集細胞,并按要求進行檢測。
        圖一:GBfectene-Elite轉染試劑的操作流程
         

           
        表一: 貼壁細胞或懸浮細胞接種數量、培養基體積
         
        培養器皿 每孔表面積(cm2) 每孔相對面積 (vs. 96-孔板) 每孔培養基的體積 (ml) 貼壁細胞在轉染前一天接種密度 懸浮細胞在轉染
        當天接種密度1
        96-孔板 0.32 1X 0.1 1 - 2x104 2 - 5x104
        48-孔板 0.75 2.3X 0.2 2 - 5x104 0.4 - 1x105
        24-孔板 2 6.3X 0.5 0.6 - 1.3x105 1 - 2.5x105
        12-孔板 4 13X 1 1.3 - 2.6x105 2 - 5x105
        6-孔板 9.5 30X 2 3 - 6x105 0.4 - 1x106
        60 mm 21 66X 5 0.6 - 1.3x106 1 - 2.5x106
        100 mm 56  175X 10 1.8 - 3.5x106 2 - 5x106
          注1:貼壁細胞培養密度取決于培養器皿的表面積,而懸浮細胞的密度則由培養基體積決定,確保轉染時細胞密度在70-80%
           
        表二: 對常規和敏感細胞起始轉染條件
         
        養器皿 每孔中培養基的體積 (ml) 轉染復合物中 DNA含量范圍(µg) 轉染稀釋液(無血清DMEM) 體積(µl)

        常規細胞每孔轉染試劑用量范圍 (µl)2

        96-孔板 0.1 0.1 20 0.3 - 0.6
        48-孔板 0.2 0.2 40 0.6 - 1.2
        24-孔板 0.5 0.5-1 100 1.5 - 3.0
        12-孔板 1 1-2 200 3.0 - 6.0
        6-孔板 2 2-4 400 6.0 - 12
        60 mm 5 5-10 1000 15 - 30
        100 mm 10 10-20 2000 30 - 60
           注2:GBfectene-Elite轉染試劑的用量在此范圍內優化 
           
        表三: 使用 GBfectene-Elite成功進行細胞轉染的范例
         
        細胞類型 24孔板接種密度 每孔培基體積 (ml) 轉染復合物中DNA含量 (μg) 轉染稀釋液(無血清DMEM) 體積(µl) GBfectene-Elite用量范圍(µl)3
        HEK293 293T 1.3x105 0.5 0.5 100 2.0-3.0
        CHO-K1 0.9x105 0.5 0.5 100 1.5-2.5 
        COS-7 1x105 0.5 0.5 100 1.5-2.5
        Hela 0.9x105 0.5 0.5 100 1.5-2.0
        HepG2 0.9x105 0.5 1.0  100 2.0-3.0
        MCF-7 1.2x105 0.5 0.5 100 2.0-2.5 
        NIH3T3 0.9x105 0.5 1.0 100 2.5-3.0
        RAW264.7 1.5x105 0.5 1.0 100 1.5-2.5
         

          注3: 如果在轉染后發現細胞毒性,減少GBfectene-Elite轉染試劑的用量

        編號 名稱 規格 產品價格(RMB
        GB1001-750 GBfectene -Elite 轉染試劑 0.75ml 1700
        GB1001-1500 GBfectene -Elite 轉染試劑 1.5ml 2800


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