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        • YOKOGAWA 雙轉盤激光共聚焦高內涵成像分析系統CQ1
        • MultiNA微芯片電泳儀
        • MR SOLUTIONS 小動物核磁共振活體成像系統
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        穩定細胞株構建服務

        穩定細胞株構建服務

        一、穩定細胞株構建服務介紹
          建立體外培養穩定細胞株對許多研究者來說是件非常痛苦的事,主要是因為:  
        1、耗時周期長(一般順利的話,從轉染到鑒定完成凍存細胞要2個月左右),中途一旦發生污染則前功盡棄,最后得不到單克隆也需要重新開始;
        2、對細胞培養要求高,要保證細胞狀態良好,尤其是保證無支原體污染,并能從單個細胞長成單克;
        3、需要積累很多經驗,才能高效一次成功篩選出整合率100%的單克隆,從而避免常見的單克隆不純現象;
        4、建立誘導表達穩定株更是許多研究人員的噩夢,花費半年時間試圖建立一個誘導表達株,最后卻無功而返是極為常見的事;
         
          慢病毒載體由于整合率高,是非常理想的穩定株構建工具,通過控制慢病毒顆粒的轉染實驗條件,理論上可以確保每個細胞只有單拷貝插入。同時,由于病毒載體是通過病毒重組酶將外源片段整合入染色體中,其整合特性和病毒自身整合特性非常相似,偏向于轉錄活躍區段,且整合后非常穩定,在傳代100次后仍然保留在宿主基因組中。最重要的是整合幾率和所有其它化學,物理轉染方法比,增加5至6個數量級,使得穩定株構建不再成為實驗研究的障礙。由于整合幾率非常高,所以很容易獲得混合穩定株。
         
          我們采用美國進口的第三代慢病毒載體系統(詳見慢病毒載體構建服務),病毒顆粒包膜上嵌合了來自水泡口炎病毒(Vesicular Stomatitis Virus)的VSV-G蛋白,使病毒能感染更多種細胞(包括分裂、非分裂細胞、難以轉染的細胞)、模式動物、活體實驗,并且表達更趨穩定。
         
        高度安全:
         
          我們的慢病毒顆粒將生物安全性保證到了最大程度,其中HIV-1來源的pSIH系列shRNA慢病毒載體來源于能用于美國臨床基因治療的慢病毒, 專利號位美國Dr. J. G. Sodroski 的US patent #5,665,577 和 #5,981,276。
         
        3 ΔLTR (ΔU3)
          3’ LTR區域刪除了U3,使其不再有啟動/增強活性,成為自滅活(self-inactivating, SIN)載體,即整合到細胞基因組后,不會產生新的子代病毒,也降低了對周圍基因的意外激活。
        RSV/5’LTR RSV雜交啟動子-R/U5’長末端重復序列)
          采用雜合型RSV的增強子/啟動子-R/U5’長末端重復序列,這樣病毒轉錄時不依賴tat的存在,去除了 HIV的tat基因表達。,tat在HIV-1基因組復制和轉錄延伸過程中發揮重要作用
        慢病毒骨架設計
          僅保留了三個HIV-1病毒包裝、復制與轉導必需基因(gag, pol, rev) ,因其缺乏HIV­-1增強子啟動子序列,即使存在所有的病毒蛋白也不能轉錄出HIV RNA
        慢病毒顆粒中無HIV-1基因
          因為HIV-1表達的包裝質粒都缺乏包裝信息,所以,慢病毒顆粒不具有復制能力
        假病毒顆粒
          慢病毒顆粒實為假病毒顆粒,只表達目的基因
        水皰性口炎病毒(VSV)糖蛋白G包膜
          限制慢病毒成為野生型的可能性
         
         
        二、我們的服務優勢
        服務流程:

        慢病毒包裝服務儲存計劃:
          我們會為客戶將定制好的慢病毒顆粒及載體做額外備份,免費儲存一段時間。以免客戶在后面的實驗中發生意外而急需。如有需要,也可以更優惠的價格再次訂購。詳情請參見慢病毒包裝服務儲存計劃。
         
        技術力量:
          我們的主要生產人員均為博士后或博士,我們生產人員常規包裝的慢病毒包裝顆粒滴度均在>10^9 IFUs/ml以上。
        三、穩定細胞株構建服務列表
        穩定細胞株構建服務列表:
        編號
        穩定細胞株構建服務
        可提供細胞數量
        工作日
        E200001
        載體、慢病毒顆粒和穩定細胞株
        >1*10^ 6~9 個/ml
        30
         
         
         
        說明:  
        1、FIV來源的載體只能包裝成常規滴度的慢病毒。
        2、所表達片段確保對目的細胞無毒性或者不抑制細胞增殖。
        3、穩定株構建服務需要的細胞必須確保無支原體,黑膠蟲或者其它微生物,真菌污染。我們只接受ATCC和DSMZ來源的無污染的細胞,或者由本公司代購ATCC和DSMZ的細胞株,進行細胞株構建服務。


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